ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭНАНТИОМЕРНОЙ ЧИСТОТЫ ПЕМЕТРЕКСИДА НА СОРБЕНТАХ С ИММОБИЛИЗОВАННЫМИ МАКРОЦИКЛИЧЕСКИМИ АНТИБИОТИКАМИ

Аннотация

Исследовано энантиоразделение пеметрекседа на сорбентах с иммобилизованными на поверхности силикагеля макроциклическими гликопептидными антибиотиками. Пеметрексед относится к фармакологической группе антиметаболидов, обладающих противоопухолевой активностью; структурный аналог фолиевой кислоты. Систематическое (ИЮПАК) наименование динатриевая соль (2S)-2-[[4-[2-(2-амино-4-оксо-4,7-дигидро-1H-пиррол[2,3-d]пиримидин-5-ил)этил]бензоил]-глутаминовой кислоты гептагидрат, действующее вещество ‒ L-изомер пеметрекседа. Механизм противоопухолевого действия пеметрекседа обусловлен ингибированием синтеза пуринов и пиримидинов. Для того чтобы выявить, как влияет структура антибиотика, взятого в качестве хирального селектора, на энантиоразделение веществ, для разделения энантиомеров использовали неподвижные фазы с отличающимися по своей структуре антибиотиками ‒ эремомицином (коммерческая колонка Nautilus-E (ЗАО «Био-Хим-Мак», Россия)) и агликоном тейкопланина (ChirobioticTAG (Astec, США)). Разделение энантиомеров проводили в обращенно-фазовом и полярно-ионном режимах хроматографии. Для разделения энантиомеров в обращенно-фазовом режиме хроматографии в качестве подвижной фазы использовали смесь раствора дигидрофосфата аммония (NH₄H₂PO₄) и органических растворителей – метанол (MeOH), ацетонитрил (ACN), в полярно-ионном режиме – органические растворители (метанол, ацетонитрил) с добавками кислот (ледяная уксусная кислота и муравьиная кислота) и оснований (триэтиламин и диэтиламин). Исследовали влияние природы и концентрации компонентов подвижной фазы, ее состава и pH на разделение энантиомеров пеметрекседа на силикагеле, модифицированном эремомицином и агликоном тейкопланина. Энантиомеры пеметрекседа удалось разделить с разрешением 2.8-3.3 на колонке Nautilus-E в обращенно-фазовом режиме. Полярно-ионный режим хроматографии не дал положительных результатов, разделить энатиомеры не удалось: пеметрексед практически не удерживался на колонке (значение фактора удерживания k` = 0.1 ÷ 0.3) независимо от концентрации добавки кислоты и амина в подвижную фазу. Проведенные исследования энантиоразделения пеметрекседа на сорбенте с агликоном тейкопланина в обращенно-фазовом и полярно-ионном режимах хроматографии показали, что энантиомеры пеметрекседа невозможно разделить с данным селектором. Агликон тейкопланина содержит только одну аминогруппу, по сравнению с тремя у эремомицина, что уменьшает электростатические взаимодействия между макроциклическим антибиотиком и пеметрекседом, и на сорбенте, модифицированным агликоном тейкопланина, он удерживается слабо. Эремомицин содержит значительно больше хиральных центров по сравнению с агликоном тейкопланина Кроме того, лучшая селективность разделения энантиомеров реализуется за счет образования водородных связей и дипольных взаимодействий с амидными и гидроксильными группами эремомицина и за счет гидрофобных взаимодействий. Показана возможность определения энантиомерной чистоты фармацевтического препарата на колонке Nautilus-E при элюировании подвижной фазой: (55 : 15 : 30) % об. MeOH : ACN : NH₄H₂PO₄ (50 мM, pH = 2.5), время анализа составляет меньше 10 минут, D-изомер не обнаружен. Предел обнаружения соединения, оцененный по отношению сигнал/фон = 3 : 1 составил 0.0003 мг/мл, что соответствует 0.12 % мас. D-формы по отношению к общему количеству препарата.

         Ключевые слова: макроциклические гликопептидные антибиотики, хиральные селекторы, энантиомеры, оптическая чистота лекарственных форм

DOI: http://dx.doi.org/10.15826/analitika.2016.20.2.002