ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ТВЕРДОФАЗНОЙ ЭКСТРАКЦИИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В СПОРТЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ В МОЧЕ ЧЕЛОВЕКА МЕТОДОМ УВЭЖХ-МС/МС

E. V. Dmitrieva, A. Z. Temerdashev, A. A. Azaryan, E. M. Gashimova

Аннотация


Предложена методика определения в моче некоторых селективных модуляторов андрогенных рецепторов, а именно андарина (S-4, GTx-007), остарина (S-22, GTx-024, MK-2866) и лигандрола (LGD-4033, VK-5211), а также фитостероида лаксогенина и ибутаморена (MK-677), непептидого секрета гормона роста, большинство из которых запрещены к употреблению спортсменами Всемирным антидопинговым агентством по причине их анаболического действия. Для очистки и концентрирования аналитов была исследована возможность применения твердофазной экстракции с использованием патронов Varian Bond Elut C8 (100 мг, 1 мл), Biotage Isolute C18 (EC) (100 мг, 1 мл) и Waters Oasis HLB (30 мг, 1 мл). С целью достижения оптимального разделения аналитов использовали обращенно-фазовый вариант ультра-высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением тройного квадрупольного масс-спектрометра в качестве детектора в режиме регистрации положительно и отрицательно заряженных ионов. Пределы обнаружения аналитов находятся в диапазоне 0.1–0.5 нг/мл, пределы определения составляют 0.5–2.5 нг/мл. Градуировочные кривые линейны в широком диапазоне концентраций. Проведена оценка матричных эффектов на результаты определения аналитов и показано, что они не оказывают мешающего влияния на результаты определения. Методика была апробирована на реальных образцах мочи после однократного перорального употребления 15 мг действующего вещества. Спустя 12 часов во всех образцах мочи были обнаружены определяемые аналиты, их концентрации лежали в линейном диапазоне градуировочных зависимостей, что свидетельствует о возможности использования предложенной методики для определения исследуемых аналитов в моче человека.

Ключевые слова: УВЭЖХ-МС/МС, САРМ, лаксогенин, ибутаморен, твердофазная экстракция, допинг-контроль

 DOI: http://dx.doi.org/10.15826/analitika.2018.22.3.008


Полный текст:

PDF

Литература


REFERENCES

Narayanan R., Coss C.C., Dalton J.T. [Development of Selective Androgen Receptor Modulators (SARMs)]. Molecular and Cellular Endocrinology, 2018, vol. 465, pp. 134-142. doi: 10.1016/j.mce.2017.06.013.

Chen J., Hwang D.J., Bohl C.E., Miller D.D., Dalton J.T. [A selective androgen receptor modulator for hormonal male contraception]. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 2005, vol. 312, no. 2, pp. 546-553. doi: 10.1124/jpet.104.075424.

Segal S., Narayanan R., Dalton J.T. [Therapeutic potential of the SARMs: revisiting the androgen receptor for drug discovery]. Expert Opinion on Investigational Drugs, 2006, vol. 15, no. 4, pp. 377-387. doi: 10.1517/13543784.15.4.377.

Dalton J.T., Mukherjee A., Zhu Z., Kirkovsky L., Miller D.D. [Discovery of nonsteroidal androgens]. Biochemical and Biophysical Research Communications, 1998, vol. 244, no. 1, pp. 1-4. doi: 10.1006/bbrc.1998.8209.

Hamann L.G., Mani N.S., Davis R.L., Wang X.N., Marschke K.B., Jones T.K. [Discovery of a potent, orally active, nonsteroidal androgen receptor agonist: 4-ethyl-1,2,3,4-tetrahydro-6-(trifluoromethyl)-8-pyridono[5,6-g]-quinoline (LG121071)]. Journal of Medicinal Chemistry, 1999, vol. 42, no. 3, pp. 210-212. doi: 10.1021/jm9806648.

Edwards J.P., West S.J., Pooley C.L.F. [New nonsteroidal androgen receptor modulators based on 4-(trifluoromethyl)-2(1H)-pyrrolidino[3,2-g]quinolinone]. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 1998, vol. 8, pp. 745-750.

Negro-Vilar A. [Selective androgen receptor modulators (SARMs): a novel approach to androgen therapy for the new millennium]. The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 1999, vol. 84, no. 10, pp. 3459-3462. doi: 10.1210/jcem.84.10.6122.

Hanada K., Furuya K., Yamamoto N., Nejishima H., Ichikawa K., Nakamura T., Miyakawa M., Amano S., Sumita Y., Oguro N. [Bone anabolic effects of S-40503, a novel nonsteroidal selective androgen receptor modulator (SARM), in rat models of osteoporosis]. Biological and Pharmaceutical Bulletin, 2003, vol. 26, no. 11, pp. 1563-1569.

Zhang X., Allan G.F., Sbriscia T., Linton O., Lundeen S.G., Sui Z. [Synthesis and SAR of novel hydantoin derivatives as selective androgen receptor modulators]. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2006, vol. 16, no. 22, pp. 5763-5766. doi: 10.1016/j.bmcl.2006.08.084.

Krug O., Thomas A., Walpurgis K., Piper T., Sigmund G., Schänzer W., Laussmann T., Thevis M. [Identification of black market products and potential doping agents in Germany 2010-2013]. European Journal of Clinical Pharmacology, 2014, vol. 70, no. 11, pp. 1303-1311. doi: 10.1007/s00228-014-1743-5.

Zhang X., Sui Z. [Deciphering the selective androgen receptor modulators paradigm]. Expert Opinion on Drug Discovery, 2013, vol. 8, no. 2, pp. 191-218. doi: 10.1517/17460441.2013.741582.

Dalton J.T., Taylor R.P., Mohler M.L., Steiner M.S. [Selective androgen receptor modulators for the prevention and treatment of muscle wasting associated with cancer]. Current Opinion in Supportive and Palliative Care, 2013, vol. 7, no. 4, pp. 345-351. doi: 10.1097/SPC.0000000000000015.

Miller C.P., Shomali M., Lyttle C.R., O'Dea L.S., Herendeen H., Gallacher K., Paquin D., Compton D.R., Sahoo B., Kerrigan S.A., Burge M.S., Nickels M., Green J.L., Katzenellenbogen J.A., Tchesnokov A., Hattersley G. [Design, synthesis, and preclinical characterization of the selective androgen receptor modulator (SARM) RAD140]. ACS Medicinal Chemistry Letters, 2010, vol. 2, no. 2, pp. 124-129. doi: 10.1021/ml1002508.

Miller C.P., Bhaket P., Muthukaman N., Lyttle C.R., Shomali M., Gallacher K., Slocum C., Hattersley G. [Synthesis of potent, substituted carbazoles as selective androgen receptor modulators (SARMs)]. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2010, vol. 20, no. 24, pp. 7516-7520. doi: 10.1016/j.bmcl.2010.09.140.

Akita K., Harada K., Ichihara J., Takata N., Takahashi Y., Saito K. [A novel selective androgen receptor modulator, NEP28, is efficacious in muscle and brain without serious side effects on prostate]. European Journal of Pharmacology, 2013, vol. 720, no. 1-3, pp. 107-114. doi: 10.1016/j.ejphar.2013.10.042.

Schmidt A., Kimmel D.B., Bai C., Scafonas A., Rutledge S., Vogel R.L., McElwee-Witmer S., Chen F., Nantermet P.V., Kasparcova V., Leu C.T., Zhang H.Z., Duggan M.E., Gentile M.A., Hodor P., Pennypacker B., Masarachia P., Opas E.E., Adamski S.A., Cusick T.E., Wang J., Mitchell H.J., Kim Y., Prueksaritanont T., Perkins J.J., Meissner R.S., Hartman G.D., Freedman L.P., Harada S., Ray W.J. [Discovery of the selective androgen receptor modulator MK-0773 using a rational development strategy based on differential transcriptional requirements for androgenic anabolism versus reproductive physiology]. Journal of Biological Chemistry, 2010, vol. 285, no. 22, pp. 17054-17064. doi: 10.1074/jbc.M109.099002.

World Anti-Doping Agency. The World Anti-Doping Code. The 2008 Prohibited List. International Standard. Available at: https://www.wada-ama.org/sites/default/files/resources/files/WADA_Prohibited_List_2008_EN.pdf (Accessed 5 July 2018).

Iglesias-Arteaga M.A., Símuta-Lopez E.M., Xochihua-Moreno S., Viñas-Bravo O., Smith S.M., Reyes S.M., Sandoval-Ramírez J. [A convenient procedure for the synthesis of 3b-hydroxy-6-oxo-5a-steroids. Application to the synthesis of laxogenin]. Journal of the Brazilian Chemical Society, 2005, vol. 16, no. 3. doi: 10.1590/S0103-50532005000300011.

Bajguz A., Tretyn A. [The chemical characteristic and distribution of brassinosteroids in plants]. Phytochemistry, 2003, vol. 62, pp. 1027-1046.

Adunsky A., Chandler J., Heyden N., Lutkiewicz J., Scott B.B., Berd Y., Liu N., Papanicolaou D.A. [MK-0677 (ibutamoren mesylate) for the treatment of patients recovering from hip fracture: a multicenter, randomized, placebo-controlled phase IIb study]. Archives of Gerontology and Geriatrics, 2011, vol. 53, no. 2, pp. 183-189. doi: 10.1016/j.archger.2010.10.004.

Constanzer M.L., Chavez-Eng C.M., Matuszewski B.K. [Determination of a novel growth hormone secretagogue (MK-677) in human plasma at picogram levels by liquid chromatography with atmospheric pressure chemical ionization tandem mass spectrometry]. Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications, 1997, vol. 693, no. 1, pp. 131-137.

Hansson A., Knych H., Stanley S., Thevis M., Bondesson U., Hedeland M. [Characterization of equine urinary metabolites of selective androgen receptor modulators (SARMs) S1, S4 and S22 for doping control purposes]. Drug Testing Analysis, 2015, vol. 7, no. 8, pp. 673-683. doi: 10.1002/dta.1768.

Grata E., Perrenoud L., Saugy M., Baume N. [SARM-S4 and metabolites detection in sports drug testing: a case report]. Forensic Science International, 2011, vol. 213, no. 1-3, pp. 104-108. doi: 10.1016/j.forsciint.2011.07.014.

Starcevic B., Ahrents B.D., Butch A.W. Detection of the selective androgen receptor modulator S-4 (Andarine) in a doping control sample. Drug Testing Analysis, 2013, vol. 5, no. 5, pp. 377-379. doi: 10.1002/dta.1466.

Cox H.D., Eichner D. [Detection of LGD-4033 and its metabolites in athlete urine samples]. Drug Testing and Analysis, 2017, vol. 9, no. 1, pp. 127-134. doi: 10.1002/dta.1986.

Sobolevsky T., Prasolov I., Rodchenkov G. [Urinary metabolism of ibutamoren, a small molecule growth hormone secretagogue]. Recent advances in Doping Control, 2013, pp. 182-186.

Thevis M., Gerace E., Thomas A., Beuck S., Geyer H., Schlörer N., Kearbey J.D., Dalton J.T., Schänzer W. [Characterization of in vitro generated metabolites of the selective androgen receptor modulators S-22 and S-23 and in vivo comparison to post-administration canine urine specimens]. Drug Testing Analysis, 2010, vol. 2, no. 11-12, pp. 589-598. doi: 10.1002/dta.211.

Thevis M., Kamber M., Schänzer W. [Screening for metabolically stable aryl-propionamide-derived selective androgen receptor modulators for doping control purposes]. Rapid Communications in Mass Spectrometry, 2006, vol. 20, no. 5, pp. 870-876. doi: 10.1002/rcm.2389.

Dmitrieva E.V., Temerdashev A.Z., Azaryan A.A., Gashimova E.M. [UHPLC-MS/MS method application for the determination of several anabolic agents and nootropics in the urine]. Analytics and Control, 2018, vol. 22, no. 1, pp. 28-34. doi: http://dx.doi.org/10.15826/analitika.2018.22.1.005 (in Russian).

Viette V., Fathi M., Rudaz S., Hochstrasser D., Veuthey J.L. [Current role of liquid chromatography coupled to mass spectrometry in clinical toxicology screening methods]. Clinical Chemistry and Laboratory Medicine, 2011, vol. 49, no. 7, pp. 1091-1103. doi: 10.1515/CCLM.2011.182.

Trufelli H., Palma P., Famiglini G., Cappiello A. [An overview of matrix effects in liquid chromatography-mass spectrometry]. Mass Spectrometry Reviews, 2011, vol. 30, no. 3, pp. 491-509. doi: 10.1002/mas.20298.

Matuszewski B.K., Constanzer M.L., Chavez-Eng C.M. [Strategies for the assessment of matrix effect in quantitative bioanalytical methods based on HPLC-MS/MS]. Analytical Chemistry, 2003, vol. 75, no. 13, pp. 3019-3030.

FDA. Guidance for Industry: Bioanalytical Method Validation. US Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration (FDA), Rockville, USA. Available at: http://www.fda.gov/downloads/drugs/guidancecomplianceregulatoryinformation/guidances/ucm368107.pdf (Accessed 5 July 2018).


Ссылки

  • На текущий момент ссылки отсутствуют.