УВЭЖХ-МСВР - ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕКОТОРЫХ РИЛИЗИНГ-ПЕПТИДОВ ГОРМОНА РОСТА В МОЧЕ
Аннотация
Повсеместное распространение ряда рилизинг-пептидов гормона роста и их употребление в профессиональном и любительском спорте в силу специфических свойств этих вспомогательных препаратов влечет за собой непрестанное внимание со стороны надзорных органов. Помимо проведения экспертиз изъятых материалов с целью установления действующих компонентов, присутствующих в них, целесообразен и необходим контроль их содержания в моче на уровне следовых концентраций. Это обусловлено тем, что эффективные дозы употребления рилизинг-пептидов гормона роста относительно невысоки, и скорость выведения их из организма зачастую не позволяет проводить определение нативных соединений и их метаболитов уже спустя несколько дней после употребления. Предложена методика определения некоторых рилизинг-пептидов гормона роста в моче с использованием ультравысокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией высокого разрешения и твердофазным концентрированием аналитов. Изучена возможность применения различных сорбентов для проведения твердофазной экстракции. Оценена чувствительность определения этих веществ предложенным методом, установлено, что наибольшей чувствительности можно добиться с использованием подвижной фазы, состоящей из 0.1 % раствора трифторуксусной кислоты в воде и ацетонитрила, подкисленного трифторуксусной кислотой (0.1 %). Установлен фактор концентрирования при применении твердофазной экстракции. Из представленных данных видно, что наибольшая эффективность извлечения достигается благодаря применению катионообменных сорбентов, в то время как октадецильный сорбент, фактически, является неэффективным для решения поставленной задачи. Установлено, что матричные эффекты при выполнении исследований не превышали 15 %. Применение МСВР позволяет обеспечить высокую чувствительность благодаря селективности метода.
Ключевые слова: ВЭЖХ-МСВР, рилизинг-пептиды, допинг, масс-спектрометрия
Полный текст:
PDF (Russian)Литература
REFERNCES
Thevis M., Kuuranne T., Geyer H. Annual banned‐substance review: Analytical approaches in human sports drug testing. Drug Testing and Analysis, 2018, vol. 10, pp. 9–27. DOI: 10.1002/dta.2336
Fragkaki A.G., Kioukia-Fougia N., Kiousi P., Kioussi M., Tsivou M. Challenges in detecting substances for equine anti-doping. Drug Testing and Analysis, 2017, vol. 9, p. 1291–1303. DOI:10.1002/dta.2162
Knoop A., Thomas A., Bidlingmaier M., Delahaut P., Schänzer W., Thevis M. Probing for corticotropin‐releasing hormone (CRH) in human blood for doping control purposes using immunoaffinity purification and LC‐HRMS/MS. Analytical Methods, 2017, vol. 9, pp. 4304‐4310. DOI:10.1039/C7AY01349C
Thomas A., Walpurgis K., Krug O., Schänzer W., Thevis M. Determination of prohibited, small peptides in urine for sports drug testing by means of nano-liquid chromatography/benchtop quadrupole orbitrap tandem-mass spectrometry. Journal of Chromatography A, 2012, vol. 1259, pp. 251–257. DOI:10.1016/j.chroma.2012.07.022
Zvereva I., Dudko G., Dikunets M. Determination of GnRH and its synthetic analogues' abuse in doping control: Small bioactive peptide UPLC–MS/MS method extension by addition of in vitro and in vivo metabolism data; evaluation of LH and steroid profile parameter fluctuations as suitable biomarkers. Drug testing and analysis, 2018, vol. 10, pp. 711–722. DOI:10.1002/dta.2256
Labutin A.V., Temerdashev A.Z. Nontarget Screening of the Markers of Synthetic Cannabinoids in Urine Using HPLC–MS/MS. Journal of Analytical Chemistry, 2015, vol. 70, pp.1620–1628. DOI:10.1134/S1061934815140087
Rosano T.G., Wood M., Swift T.A. Postmortem Drug Screening by Non-Targeted and Targeted Ultra-Performance Liquid Chromatography–Mass Spectrometry Technology. Journal of Analytical Toxicology, 2011, vol. 35, pp. 411–423. DOI: 10.1093/anatox/35.7.411
WADA Prohibited list 2019 (2019). Available at: https://www.wada-ama.org/sites/default/files/wada_2019_english_prohibited_list.pdf [accessed 21 August 2019]
Han D.S., Huang C.H., Chen S.Y., Yang W.S. Serum reference value of two potential doping candidates‐myostatin and insulin‐like growth factor‐I in the healthy young male. Journal of the International Society of Sports Nutrition, 2017, vol.14, pp. 1–7. DOI:10.1186/s12970-016-0160-9
Esposito S., Deventer K., Goeman J., Van der Eycken J., Van Eenoo P. Synthesis and characterization of the N-terminal acetylated 17-23 fragment of thymosin beta 4 identified in TB-500, a product suspected to possess doping potential. Drug Testing and Analysis, 2012, vol. 4, pp.733–738. DOI:10.1002/dta.1402
Esposito S., Deventer K., Van Eenoo P. Characterization and identification of a C-terminal amidated mechano growth factor (MGF) analogue in black market products. Rapid Communications in Mass Spectrometry, 2012, vol. 26, pp. 686–692. DOI:10.1002/rcm.6144
Thomas A., Kohler M., Mester J., Geyer H., Schänzer W., Petrou M., Thevis M. Identification of the growth-hormone-releasing peptide-2 (GHRP-2) in a nutritional supplement. Drug Testing and Analysis, 2010, vol.2, pp.144–148. DOI:10.1002/dta.120
Temerdashev A.Z., Gorshenina A.V., Svetlichnaya E.V., Labutin A.V. [Wrong-way-round ionization and hydrophilic liquid chromatography in the analysis of insulin-like growth factors]. Analitika i kontrol’ [Analytics and Control], 2016, vol. 20, no. 2, pp. 154-160. DOI:10.15826/analitika.2016.20.2.003 (in Russian)
Thomas A., Schänzer W., Thevis M. Immunoaffinity techniques coupled to mass spectrometry for the analysis of human peptide hormones: advances and applications. Expert Review of Proteomics, 2017, vol. 14, pp. 799‐807. DOI:10.1080/14789450.2017.1362338
Thomas A., Knoop A., Schänzer W., Thevis M. Characterization of in vitro generated metabolites of selected peptides <2 kDa prohibited in sports Drug testing and analysis, 2017, vol. 9, pp. 1799-1803. DOI:10.1002/dta.2306
Ikegami T. Hydrophilic interaction chromatography for the analysis of biopharmaceutical drugs and therapeutic peptides: A review based on the separation characteristics of the hydrophilic interaction chromatography phases. Journal of Separation Sciences, 2019, vol. 42, pp. 130–213. DOI:10.1002/jssc.201801074
Minimum required performance levels for detection and identification of non-threshold substances / WADA Technical Document – TD2019MRPL (2019). Available at: https://www.wada-ama.org/sites/default/files/resources/files/td2019mrpl_eng.pdf [accessed 21 August 2019]
Thomas A., Walpurgis K., Delahaut P., Fichant E., Schänzer W., Thevis M. Determination of LongR3‐IGF‐I, R3‐IGF‐I, Des1‐3 IGF‐I and their metabolites in human plasma samples by means of LC‐MS. Growth Hormone and IGF Research, 2017, vol. 35, pp. 33‐39. DOI:10.1016/j.ghir.2017.06.002
Semenistaya E., Krotov G., Rodchenkov G. Determination of growth hormone releasing peptides metabolites in human urine after nasal administration of GHRP-1, GHRP-2, GHRP-6, Hexarelin, and Ipamorelin. Drug Testing and Analysis, 2015, vol. 7, pp. 919-925. DOI:10.1002/dta.1787
Thomas A., Kohler M., Mester J., Geyer H., Schaenzer W., Petrou M., Thevis M. Identification of the growth-hormone-releasing peptide-2 (GHRP-2) in a nutritional supplement. Drug testing and analysis, 2010, vol. 2, pp. 144-148. DOI:10.1002/dta.120
Guan F., Robinson M.A. Comprehensive solid-phase extraction of multitudinous bioactive peptides from equine plasma and urine for doping detection. Analytica Chimica Acta, 2017, vol. 985, pp. 75–90. DOI: 10.1016/j.aca.2017.07.005
Cuervo D., Loli C., Fernandez-Alvarez M., Munoz G., Carreras D. Determination of doping peptides via solid-phase microelution and accuratemass quadrupole time-of-flight LC–MS. Journal of Chromatography B, 2017, vol. 1065–1066, pp. 134–144.
Judak P., Polet M., Van Eenoo P., Benoit A., Buisson C. Peptide enrichment by ion–pair solid-phase extraction. Journal of Chromatography B, 2019, vol. 1121, pp. 89–95.
Acceptance Criteria for Confirmation of Identity of Chemical Residues using Exact Mass Data for the FDA Foods and Veterinary Medicine Program. Available at: https://www.fda.gov/media/96499/download [accessed 15 October 2019].
DOI: https://doi.org/10.15826/analitika.2019.23.4.008
Ссылки
- На текущий момент ссылки отсутствуют.